Mesure et indicateurs

Méthode de détection de la fluorescence chlorophylienne

La mesure de l’absorbance UV-visible de l’épiderme foliaire est basée sur la fluorescence émise par la chlorophylle située dans le mésophylle. L’épiderme des feuilles agit comme un filtre physique pour le rayonnement optique incident en réduisant la quantité de lumière qui induit l’émission de fluorescence par la chlorophylle. Cependant, les effets de filtrage sont très différents suivant la longueur d’onde, étant donné qu’ils sont fortement dépendants de la composition moléculaire des feuilles.

Par exemple, dans le cas des flavonols, le rayonnement UV est fortement absorbé par l’épiderme, tandis que dans la plage rouge, l’absorption est très faible. La fluorescence chlorophyllienne, induite séparément par chaque source de lumière, est ensuite mesurée dans l’infrarouge proche à l’aide d’un photodétecteur (Figure 1).

La méthode logFER (Figure 2) est ensuite utilisée pour calculer l’absorbance optique de l’épiderme où :

1. I Rouge est l’intensité de la lumière d’excitation rouge,
2. I UV est l’intensité de la lumière d’excitation UV,
3. T est la transmittance épidermique,
4. f est le rendement de fluorescence,
5. F est l’intensité de fluorescence chlorophyllienne,
6. ARouge est le facteur d’absorption de la chlorophylle dans le rouge,
7. AUV est le facteur d’absorption de la chlorophylle dans l’UV.

En utilisant cette notation, l’intensité de fluorescence à chaque longueur d'onde d’excitation est :

l’absorbance optique de l’épiderme dans la plage UV peut être directement obtenue à partir du rapport des intensités de fluorescence chlorophyllienne à la longueur d’onde de référence rouge et à la longueur d’onde de mesure UV :

où C est la constante de l’instrument.